Expresión PR

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y métodos de inserción DNA

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Regina Romero

Mexico

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#	Jeux	Précision	temps
1	Regina Romero 5 Août 2025	% 100	02:44

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Expresión PR


Expresión PRVersion en ligne y métodos de inserción DNA par Regina Romero 1 Expresión de PR en Escoge una o varias respuestas a Bacterias: inestables o carentes de actividad, pueden tener endotoxinas, poca capacidad de modificación y exportación b Bacterias: modificaciones postraduccionales, escalamiento a nivel industrial, estudiadas genéticamente c Levaduras: inestables o carentes de actividad, pueden tener endotoxinas, poca capacidad de modificación y exportación d Levaduras: modificaciones postraduccionales, escalamiento a nivel industrial, estudiadas genéticamente 2 Modificaciones proteínas recombinantes a Adición de glúcidos: N-glucosilación u O-glucosilación b Maduración por modificación de aminoácidos: Acetilación, carboxilación, fosforilación, hidroxilación, metilación. c Todas las anteriores d Ninguna de las anteriores 3 Desventajas S.cerevisiae para expresión PR Escoge una o varias respuestas a perdida del plásmido durante el escalamiento b Proteínas heterólogas hiperglicosiladas Hiper glicosilacion (>100 residuos de manosa, en vez de 8-13) c Proteínas homólogas hiperglicosiladas Hiper glicosilacion (>100 residuos de manosa, en vez de 8-13) d Proteínas retenidas en el espacio periplásmico e Proteínas retenidas en el espacio ribosómico 4 Ventajas Pichia pastoris para expresión PR a crece moderadamente, densidades celulares de hasta (100g/L), medios simples compuestos de sales, biotina y fuente de carbono, fácil manipulación genética b crece rápido, densidades celulares de hasta (100g/L), medios simples compuestos de sales, biotina y fuente de carbono, moderada manipulación genética c metilotrófica, crece rápido, densidades celulares de hasta (100g/L), medios simples compuestos de sales, biotina y fuente de carbono, fácil manipulación genética, realiza glicosilaciones y plegamiento de proteínas 5 Inducción metabolismo metilotrófico P.pastoris Escoge una o varias respuestas a Gen de interés aox, genes aox1 y aox2 similares, b expresión de los genes aox se reprime con fuentes de carbono diferentes a MetOH, pero es estimulada por éste. Expresión promotor aox1 puede ser regulada de forma precisa y fácil (Met-OH) c expresión de los genes aox se reprime con fuentes de carbono diferentes a MetOH, pero es reprimida por éste. Expresión promotor aox1 puede ser regulada de forma precisa y fácil d Gen de interés aox, genes aox1 y aox2 diferentes 6 Vector de expresión YIP para P.pastoris Escoge una o varias respuestas a marcador de selección el gen de la histidinol deshidrogenasa (HIS4), genotipo de huésped pasa de his4- a his 4+ b marcador de selección el gen de la histidinol deshidrogenasa (HIS4), genotipo de huésped pasa de his4+ a his 4- c Plásmido que se integra al cromosoma en el gen aox d Plásmido que no se integra al cromosoma en el gen aox 7 Características vector YIP a oriE, oriPP, HBsAg, HIS4, AOX1t b oriE, oriPP, HBsAg, HIS4, AOX1t, AOX1-3’ c oriPP, HBsAg, HIS4, AOX1t, AOX1-3’ 8 En ausencia del gen aox1 a se pierde la mayor parte de la actividad alcohol oxidasa (80%), solo funciona aox2->genotipo MutS. Mut+ permite crecer en metanol b c d 9 Proceso donde se introduce material genético (ADN o ARN) en eucariotas de manera artificial a Transfección b Translocación c Traducción 10 Uso de microproyectiles, generalmente de oro o tungsteno, recubiertos de DNA plasmídico que contiene el gen a introducir a Biología molecular b Biotecnología c Biobalística 11 Formación de un complejo liposoma-DNA entre lípidos catiónicos y ácidos nucleicos para facilitar su transporte a través de la membrana a Lipofección b Lipidofección c Lipafección 12 Transfeccion que utiliza pulsos eléctricos breves y de alto voltaje que forma poros transitorios en la membrana celular a Electroporación b Electromagnetismo c Electroforesis 13 ADN exógeno forma complejos con polímeros catiónicos como la polietilenimina (PEI) que... a Sale de la célula por endocitosis b Sale de la célula por exocitosis c Entra a la célula por endocitosis 14 Complejo polímero catiónico + DNA a Poliplexes b Uniflexes c Polifases 15 Factor de virulencia del VHB a VBsAg b HBsAg c VHbAg 16 Introducción DNA en levaduras mas común a Método químico con acetato de litio (LiAc) + PEG + ADN:Se hacen permeables las paredes celulares para que elplásmido entre b Electroporación c Rotura de células

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Expresión de PR en

Escoge una o varias respuestas

Modificaciones proteínas recombinantes

Desventajas S.cerevisiae para expresión PR

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Ventajas Pichia pastoris para expresión PR

Inducción metabolismo metilotrófico P.pastoris

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Vector de expresión YIP para P.pastoris

Escoge una o varias respuestas

Características vector YIP

En ausencia del gen aox1

Proceso donde se introduce material genético (ADN o ARN) en eucariotas de manera artificial

Uso de microproyectiles, generalmente de oro o tungsteno, recubiertos de DNA plasmídico que contiene el gen a introducir

Formación de un complejo liposoma-DNA entre lípidos catiónicos y ácidos nucleicos para facilitar su transporte a través de la membrana

Transfeccion que utiliza pulsos eléctricos breves y de alto voltaje que forma poros transitorios en la membrana celular

ADN exógeno forma complejos con polímeros catiónicos como la polietilenimina (PEI) que...

Complejo polímero catiónico + DNA

Factor de virulencia del VHB

Introducción DNA en levaduras mas común