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lenguaVersion en ligne lengua par RAQUEL POZO GARCÍA 1 Los extractos de encapsidación que se utilizan en la construcción de genotecas a Se obtienen a partir de dos lisógenos distintos de fago lambda que portan mutaciones complementarias b Proceden de una estirpe mutante de fago lambda que no produce cabezas de fago c Proceden de una estirpe silvestre de fago lambda que no produce cabezas de fago d Son extractos proteicos de E. coli infectada con fago lambda tipo silvestre 2 Los cósmidos son plásmidos que tienen la capacidad de empaquetarse, junto con un ADN exógeno, dentro de una partícula de fago lambda in vitro a V b F 3 Si queremos utilizar E. coli como receptora de nuestro ADN modificado, deberemos utilizar a Una estirpe auxótrofa para adenina b Una estirpe que tenga mutados algunos genes de recombinación c Una estirpe sensible al gen de resistencia que porta nuestro plásmido d Cualquier estirpe nos puede servir 4 En el sistema de vectores binarios de Agrobacterium: a plásmido Ti porta el ADN-T y carece de los genes vir b El plasmido Ti porta los genes vir y carece de ADN-T c El plásmido Ti porta un gen de resistencia a antibióticos de E. coli d El plásmido que introducimos en Agrobacterium tiene secuencias bacterianas además de las que queremos transferir a la planta 5 Las características esenciales de un vector son: a Un origen de replicación b Una secuencia multidiana c Un marcador de selección d Un sitio LoxP e Todas las respuestas son correctas 6 En una placa con X-Gal y el antibiótico neomicina, aquellas bacterias sensibles (por ejemplo E. coliDH5a) que tras la transformación hayan incorporado el plásmido pUC18 que incluye nuestro gen favorito: a No crecerán b Formaran colonias blancas c Crecerán solo si añadimos adenina d Formarán colonias azules e Se convertirán en una cepa multirresistente y provocarán una pandemia mundial 7 Si tenemos que modificar los extremos de dos moléculas de ADN (vector € inserto) para poder lig podemos utilizar: a La enzima Klenow con o sin dNTPs para obtener extremos romos b Latransferasa terminal añadiendo un dNTP a un tipo de molécula (vector) y el dNTP complementario a la otra (inserto) c Adaptadores complementarios añadidos a cada tipo de molécula d Todas las respuestas son correctas 8 ¿Cómo detectarías que un gen se está expresando en un tejido determinado si tienes un fragmento de ADN complementario a parte de la región codificante de ese gen, y que puedes utilizar como sonda? a Mediante un experimento tipo northern b Mediante un experimento tipo western c Mediante un experimento tipo Southern d Mediante PCR utilizando ADN como molde e Mediante transcripción inversa + PCR f Todas las respuestas son correctas 9 Los saltos cromosómicos se utilizan: a Solamente en organismos que poseen varios cromosomas circulares b Como complemento al paseo cromosómico cuando nos encontramos con secuencias repetidas c Para aislar pseudogenes que tienen intrones de cientos de Kb d Junto con la amplificación de exones para determinar regiones codificantes del ADN 10 Una genoteca substractiva nos permite identificar genes que se expresan específicamente, bien en un momento determinado, bien en un tejido determinado. a V b F 11 El "phage display" es una técnica que: a Sebasaenla fusion de secuencias de ADN a uno de los genes de la cápsida de tal modo que la secuencia de aminoácidos queda en la parte interior del virus b Permite identificar péptidos o proteínas capaces de unirse a otras moléculas c No se puede aplicar al reconocimiento de sustancias antigénicas d Junto con la GFP permite detectar el sitio de expresión de un gen 12 Si vamos a realizar un escrutinio de nuestra genoteca con anticuerpos necesitaremos: a Haber purificado previamente la proteína de interés b Haber preparado anticuerpos mono o policlonales contra esa proteina c Que nuestra genoteca sea de expresión d Tener un anti-anticuerpo contra los anticuerpos de nuestra proteína e Todas las respuestas son correctas 13 Un Southern y un northern son esenciales para comprobar que el fragmento presente en nuestro presunto positivo corresponde, respectivamente, a ADN de nuestro organismo, y a un gen que se expresa a v b F 14 Si realizamos un experimento de un-hibrido, ¿qué esperamos encontrar? a Un gen cuyo producto génico interacciona con la proteína codificada por nuestro gen b Un gen cuyo producto génico reconoce y se une a secuencias importantes en el promotor de nuestro gen, sea activador o represor c Un represor de la transcripción de nuestro gen chivato d Un activador de la transcripción del operón lac 15 Para el escrutinio de qué tipo de genotecas utilizamos el sistema biotina-avidina? a Genotecas de expresión b Minigenotecas c Genotecas substractivas d Cualquier tipo de genoteca 16 Podemos escrutar una genoteca de ADN genómico con una sonda heteróloga si: a Utilizamos condiciones de hibridación laxas b Utilizamos condiciones de hibridación estrictas c La sonda es degenerada d Sólo podemos utilizar una sonda heteróloga para el escrutinio de genotecas de expresión 17 El escrutinio de una genoteca mediante complementación de mutaciones: a Es un método engorroso y poco fiable que requiere muchos pasos intermedios y genera muchos falsos positivos b Permite obtener al mismo tiempo un presunto positivo e identificar la función que éste lleva a cabo en la célula c Solo se puede llevar a cabo en organismos en los que tenemos un sistema de transformación muy eficiente d Es imprescindible tener bien caracterizado el mutante sobre el que vamos a realizar el escrutinio 18 Cuando realizamos un paseo y saltos cromosómicos tenemos varios criterios para saber si estamos en o cerca de una secuencia codificante: a Utilizar la amplificación de exones con cada nuevo clon b El análisis de secuencias ricas en islas CPG c El análisis tipo northern con fragmentos de cada clon d Todas las respuestas son correctas 19 Podemos utilizar oligonucleótidos degenerados para crear minigenotecas con mutaciones al azar en nuestro gen. a v b f 20 Gal4p es una proteina heterodimérica con un dominio de unión a ADN, un dominio de activación de la transcripción, y un dominio de unión a Gal80p. a V b F 21 En el silenciamiento génico inducido por ARNi a La RNasa IIl genera fragmentos de 21-23 nucleótidos b La RNA polimerasa dependiente de ARN genera moléculas de ARN2c c El complejo RISC degrada los dúplex ARNM-ARNsi d El complejo RISC degrada los dúplex ARNM-ARNsi 22 ¿Cómo podemos reducir el número de falsos positivos si hacemos un escrutinio de dos-hibridos? a Añadiendo una mayor concentración de X-Gal en las placas b Analizando sólo aquéllas colonias que hayan aparecido antes c Utilizando diferentes genes chivatos d Utilizando diferentes promotores 23 En cuanto a la mutagénesis al azar mediante PCR.. a SeusalaPCR propensa a errores teniendo en cuenta que la Taq polimerasa carece de actividad correctora de errores (exonucleasa 5' - 3') y por ello puede introducir mutaciones nuevas en cada ciclo de amplificación b Se lleva a cabo una reacción de PCR eliminando el Mn”', ya que éste es necesario para la fidelidad en la síntesis de ADN de la Taq polimerasa c Este método es siempre mejor que la mutagénesis dirigida, ya que nos permite obtener una población de moléculas mutantes mucho más diversa y que no habrá que analizar con posterioridad d Esnecesario analizar cada una de las moléculas obtenidas de la PCR para comprobar las mutaciones obtenidas 24 Para fabricar una colección de hibridos por radiacior a Eliminamos todo el ADN de una línea celular y estas células las fusionamos con otra linea que ha sido previamente irradiada con rayos X b Fusionamos dos lineas celulares, una inmortal, y otra la que queremos estudiar, y posteriormente las irradiamos con rayos X para estudiar las células supervivientes c Irradiamos con rayos X una línea celular y las células irradiadas las fusionamos a células de otra linea para analizar qué ocurre con los fragmentos de cromosomas de la primera d Irradiamos el ADN desnudo de una línea celular con rayos X e introducimos este ADN en una línea receptora 25 Un microarray preparado a partir de ARNm aislado de un tejido determinado y en un momento determinado puede ser utilizado para ver cambios en la expresión génica a lo largo del desarrollo. a V b F 26 La sintenia se puede definir como: a La localización de genes homólogos en dos organismos diferentes b La comparacién de dos genomas para buscar genes semejantes a nuestro gen favorito c La comparación de la distribución de diferentes genes a lo largo de varios genomas 27 Durante el proceso de construcción de un microarray de oligonucleótidos, tras irradiar con luz visible el soporte sólido en el que hemos llevado a cabo las primeras reacciones: a Se para la síntesis de oligonucleótido b Se añade un nuevo nucleótido al oligonucleótido ya sintetizado c La síntesis del oligonucleótido es un paso intermedio e independiente de la luz d Es mejor utilizar longitudes de onda que dañan el ADN, como rayos X o luz UV 28 ¿Qué elementos genéticos debe contener un sistema de expresión basado en el promotor del operón de la lactosa? a Promotor lac, operador lac y el terminador lac (en la expresión se emplea una cepa de E. coli portadora de la mutación lacZAM15) b Promotor /ac, operador lac y un terminador rho independiente (en la expresión se emplea una cepa lacZ de E. coli) c Promotor /ac, operador lac y los terminadores T1 y T2 ó terminadores del fago T7 (en la expresión se emplea una cepa E. coli portadora de la mutación lacZAM15) 29 El fenómeno conocido como desviación en el uso de codones en el organismo hospedador disminuye la eficiencia de los sistemas de expresión heterólogos porque: a El organismo hospedador no tiene RNAs de transferencia (tRNAs) para leer alguno o algunos codones del mRNA del gen que queremos expresar b Hay codones en el mRNA del gen que queremos expresar que son leídos por tRNAs de la célula hospedadora que están en muy baja concentración c Hay muchos codones en el mRNA del gen que queremos expresar que son leídos por el mismo tRNA de la célula hospedadora 30 En relación con los sistemas de expresión en levaduras, ¿Cuál de las siguientes afirmaciones es correcta? a Laexpresión del gen de interés en las levaduras Saccharomyces cerevisiae Y Picchia pastoris se realiza desde plásmidos episómicos o extracromosómicos b La levadura Saccharomyces cerevisiae es más eficaz para la expresión de proteínas con bajo grado de glicosilacion c El principal sistema de expresión en la levadura de Picchia pastoris se basa en el uso de los elementos genéticos del gen que codifica la alcohol oxidasa) 31 La generación de animales transgénicos o modificados genéticamente (animales GM) es un campo de trabajo muy activo que se inicia a mediados de la década de los ochenta con la metodología de: a Clonación tradicional, empleando núcleos de células somáticas que expresan el transgén b Transferencia génica mediada por esperma (SMGT) c Microinyección del transgén en óvulos fecundados 32 ¿En qué proceso se ven favorecidos los sistemas de expresión de células de mamifero que llevan la secuencia Kozak? a En la transcripción b En la estabilidad del mRNA c En la traducción 33 queremos expresar en E. coli una proteína que deriva de la expresión de un gen eucariota con intrones y esa proteína tiene un dominio capaz de unir IPTG ¿A qué sistema de expresión de E. coli deberemos recurrir para asegurar un buen nivel de expresión en la bacteria? a Al sistema de expresión basado en el promotor lac b Al sistema de expresión basado en el promotor sintético tac c Al sistema de expresión basado en promotores fago lambda, APL o APR

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par RAQUEL POZO GARCÍA

Los extractos de encapsidación que se utilizan en la construcción de genotecas

Los cósmidos son plásmidos que tienen la capacidad de empaquetarse, junto con un ADN exógeno, dentro de una partícula de fago lambda in vitro

Si queremos utilizar E. coli como receptora de nuestro ADN modificado, deberemos utilizar

En el sistema de vectores binarios de Agrobacterium:

Las características esenciales de un vector son:

En una placa con X-Gal y el antibiótico neomicina, aquellas bacterias sensibles (por ejemplo E. coliDH5a) que tras la transformación hayan incorporado el plásmido pUC18 que incluye nuestro gen favorito:

Si tenemos que modificar los extremos de dos moléculas de ADN (vector € inserto) para poder lig podemos utilizar:

¿Cómo detectarías que un gen se está expresando en un tejido determinado si tienes un fragmento de ADN complementario a parte de la región codificante de ese gen, y que puedes utilizar como sonda?

Los saltos cromosómicos se utilizan:

Una genoteca substractiva nos permite identificar genes que se expresan específicamente, bien en un momento determinado, bien en un tejido determinado.

El "phage display" es una técnica que:

Si vamos a realizar un escrutinio de nuestra genoteca con anticuerpos necesitaremos:

Un Southern y un northern son esenciales para comprobar que el fragmento presente en nuestro presunto positivo corresponde, respectivamente, a ADN de nuestro organismo, y a un gen que se expresa

Si realizamos un experimento de un-hibrido, ¿qué esperamos encontrar?

Para el escrutinio de qué tipo de genotecas utilizamos el sistema biotina-avidina?

Podemos escrutar una genoteca de ADN genómico con una sonda heteróloga si:

El escrutinio de una genoteca mediante complementación de mutaciones:

Cuando realizamos un paseo y saltos cromosómicos tenemos varios criterios para saber si estamos en o cerca de una secuencia codificante:

Podemos utilizar oligonucleótidos degenerados para crear minigenotecas con mutaciones al azar en nuestro gen.

Gal4p es una proteina heterodimérica con un dominio de unión a ADN, un dominio de activación de la transcripción, y un dominio de unión a Gal80p.

En el silenciamiento génico inducido por ARNi

¿Cómo podemos reducir el número de falsos positivos si hacemos un escrutinio de dos-hibridos?

En cuanto a la mutagénesis al azar mediante PCR..

Para fabricar una colección de hibridos por radiacior

Un microarray preparado a partir de ARNm aislado de un tejido determinado y en un momento determinado puede ser utilizado para ver cambios en la expresión génica a lo largo del desarrollo.

La sintenia se puede definir como:

Durante el proceso de construcción de un microarray de oligonucleótidos, tras irradiar con luz visible el soporte sólido en el que hemos llevado a cabo las primeras reacciones:

¿Qué elementos genéticos debe contener un sistema de expresión basado en el promotor del operón de la lactosa?

El fenómeno conocido como desviación en el uso de codones en el organismo hospedador disminuye la eficiencia de los sistemas de expresión heterólogos porque:

En relación con los sistemas de expresión en levaduras, ¿Cuál de las siguientes afirmaciones es correcta?

La generación de animales transgénicos o modificados genéticamente (animales GM) es un campo de trabajo muy activo que se inicia a mediados de la década de los ochenta con la metodología de:

¿En qué proceso se ven favorecidos los sistemas de expresión de células de mamifero que llevan la secuencia Kozak?

queremos expresar en E. coli una proteína que deriva de la expresión de un gen eucariota con intrones y esa proteína tiene un dominio capaz de unir IPTG ¿A qué sistema de expresión de E. coli deberemos recurrir para asegurar un buen nivel de expresión en la bacteria?